Геномные мутации при неразвивающейся беременности

Запись опубликована жужа// 18 июля 2012

6 189 просмотров

Геномные мутации при неразвивающейся беременности:

предварительные результаты

О.Б. БАРЦЕВА, Д.А. ХОДЖАЕВА, Е.К. ХАНДОГИНА, Г.Р. МУТОВИН

Кафедра медицинской генетики педиатрического факультета Российского государственного медицинского университета; кафедра акушерства и гинекологии лечебного факультета Российского государственного медицинского университета; лаборатория социально-психологических последствий радиационных аварий ИБРАЭ РАН, Москва

Приводятся результаты цитогенетического исследования абортивного материала, полученного от 50 пациенток с неразвивающейся беременностью. Геномные мутации выявлены в 13 случаях. Обсуждается связь аномалий кариотипа с различными показателями (возрастом матери, сроком гестации, акушерским анамнезом и пр.). Настоящее исследование является первым этапом работы, и сведения носят предварительный характер.

Ключевые слова: берменность неразвивающаяся, геном, геномные мутации, кариотип.

В структуре невынашивания на долю неразвивающейся беременности приходится от 45 до

80% всех репродуктивных потерь. Нарушения репродуктивной функции (НРФ) женского организма, выразившиеся в спонтанном прерывании беременности, могут быть обусловлены действием различных факторов, среди которых важное место занимают генетические. Показано, что геномные (числовые) мутации выявляются у 50% эмбрионов в I триместре беременности [1]. Согласно данным литературы [2], частота выявляемых аномалий кариотипа плода снижается с увеличением срока гестации: при сроке 6—7 нед 60—75%, при сроке 17—28 нед — всего 2—7%. Хромосомные нарушения такого рода у плода не сопровождаются

изменениями кариотипа родителей. Опубликован ряд работ [3—5], в которых предпринимаются попытки связать возникновение моно- и трисомий, полиплоидии (как правило, триплоидии) с различными факторами, среди которых — мутации в генах GSTT1, GSTM, MTHFR, MTRR родителей (в первую очередь, матерей). Выявлены и наиболее часто встречающиеся геномные мутации [6]. Однако не меньший интерес представляют и варианты нормального кариотипа плода, когда причины НРФ не столь очевидны и могут быть обусловлены эпигеномными нарушениями генетической регуляции, либо иными, негенетическими причинами. В настоящем сообщении представлены предварительные

результаты исследования структуры хромосомных нарушений у плода при неразвивающейся

беременности, представляющей собой одно из проявлений НРФ, а также предварительный

анализ связи соматического статуса и данных анамнеза с наличием или отсутствием геномных мутаций у плода при неразвивающейся беременности. Дальнейшее исследование будет направлено на расширение выборки, а также выявление роли генетического полиморфизма и нестабильности генома в формировании НРФ на примере неразвивающейся беременности.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

В исследование включены 49 пациенток (одна — дважды, №39 и 70, см. таблицу; далее рассматриваются как два отдельных наблюдения, поскольку речь идет о разных беременностях) с неразвивающейся беременностью в I триместре, независимо от количества беременностей в анамнезе, соматической отягощенности и возраста, но с выявленной в последующем митотической активностью в абортивном материале. Далее, на основании результата цитогенетического исследования кариотипа плода, были сформированы 2 группы: 1-я (13 пациенток) — с выявленными аномалиями кариотипа плода, 2-я (37) — с нормальным кариотипом плода. Абортивный материал был получен от пациенток с подтвержденным диагнозом неразвивающейся беременности, вошедших в указанные выше группы, путем инструментального удаления измененного плодного яйца. Критериями для постановки диагноза неразвивающейся беременности являлись несоответствие размеров матки предполагаемому сроку беременности, отсутствие сформированного эмбриона в полости плодного мешка по данным ультразвукового исследования (анэмбриония — частный случай неразвивающейся беременности), несоответствие размеров плодного мешка ожидаемым эхо-параметрам на определенном сроке беременности, несоответствие теменно-крестцового размера эмбриона ожидаемому на текущем сроке беременности, отсутствие сердцебиения и двигательной активности эмбриона, субнормальное значение хорионического гонадотропина в крови. Для цитогенетического исследования использовали «прямой» метод анализа кариотипа (некультивированных) спонтанно делящихся клеток цитотрофобласта хориона. Методика приготовления препаратов метафазных хромосом изложена ранее [7]. Суспензии клеток были получены путем дезагрегации фиксированных (этанол — уксусная кислота, 3:1) клеток ворсинчатого хориона. Дезагрегацию клеток проводили 60% уксусной кислотой. Цитогенетические исследования выполнялись с использованием стандартного анализа метафазных хромосом. Для вычисления и сравнения средних величин цифровых данных, а также для оценки достоверности полученных результатов пользовались общепринятыми формулами статистики.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Изменения кариотипа (геномные мутации) выявлены в 13 из 50 наблюдений, что составляет 26%. Результаты кариотипирования спонтанныхабортусов от пациенток с неразвивающейся беременностью приведены в таблице.

Мы попытались выявить различия между двумя группами по разным характеристикам. В настоящей работе речь идет о предварительной и приблизительной оценке, поэтому авторы на данном этапе не ставят перед собой задачу проведения тщательной статистической обработки результатов. Это будет проведено при обработке результатов дальнейших исследований.

ОБСУЖДЕНИЕ

В нашей работе частота геномных мутаций оказалась ниже, чем в исследовании Н.Н.Сухановой и соавт. [6]. Это может объясняться тем, что авторами были приведены данные 552 исследований самопроизвольного прерывания беременности, вне зависимости от диагноза и срока гестации (от 2—3 до 33—34 нед), в то время как в нашей работе, как указывалось выше, группу обследованных пациенток составили пациентки с неразвивающейся беременностью в I триместре (до 12 нед). Среди абортивного материала число носителей мужского и женского кариотипов практически не различалось (соответственно 26 женский и 24 мужской). При сравнении соотношения полов в обеих группах в отдельности различий также не было выявлено. Изменения кариотипа плода чаще возникали у пациенток, уже имевших беременность в анамнезе. Так, среди 13 беременных с изменениями кариотипа плода (1-я группа) только у 2 беременность была первой, у остальных 11 — беременности повторные. В то же время при нормальном кариотипе плода (2-я группа) число пациенток с первой и последующими беременностями примерно одинаково (17 и 20 соответственно). Мы не обнаружили связи между возрастом пациенток и возникновением хромосомных перестроек у эмбрионов: в обеих группах средний возраст составил 29±5 и 29±4 года соответственно. Не было обнаружено также связи между усредненным сроком гестации и наличием или отсутствием хромосомных изменений в абортивном материале (соответственно 9,2±2,1 и 8,6±1,9 нед). Однако сравнение распределения сроков гестации в двух группах показало, что во 2-й группе максимум приходится на период 6—8 нед гестации

(см. рисунок).

В эту фазу онтогенеза происходит построение структуры ранней плаценты, структурная организация всех органов с включением их функциональной активности, формирование фенотипа в соответствии с генотипом плода. Данный этап внутриутробного развития считается критическим периодом, когда эмбрион особенно чувствителен к повреждающему экзогенному воздействию и формированию врожденных пороков развития. Внешнесредовые факторы в такой момент оказывают более выраженное влияние на эмбрион, чем геном [8]. Это согласуется с заключением о том, что при отсутствии нарушений кариотипа ведущую роль в неразвивающейся беременности I триместра могут играть такие негенетические факторы, как функциональная незрелость системы мать — плацента — плод, недостаточность синтеза хорионического гонадотропина, дефицит прогестерона, гиперандрогения, инфекционный фактор, антифосфолипидный синдром, повреждающее действие экзогенных агентов. Нельзя забывать и о том, что геномные мутации не исчерпывают весь спектр генетических нарушений. Почти половина из обнаруженных геномных мутаций (5 из 13) в принципе совместима с жизжизнью. Примечательно, что выкидыши в случае, если хромосомные нарушения совместимы с жизнью, происходят на несколько более поздних сроках, чем при не совместимых с жизнью нарушениях(в среднем 10,5±2,0 и 8,4±1,8 нед соответственно). Возраст матери при этом практически не различался и в том, и в другом наблюдении (28±6 и 30±6 года соответственно). Разумеется, для более обоснованных заключений необходимо проанализировать больший объем материала. Приводимые в настоящей работе сравнения, как уже отмечалось, носят предварительный характер. Следует сделать важное замечание. На современном уровне наших знаний о роли генетических факторов в возникновении неразвивающейся беременности и других нарушений репродуктивной функции не представляется возможным сделать однозначное заключение даже при обнаружении или отсутствии соответствующих мутаций. Речь идет о выявлении предрасположенности, иными словами — отнесении беременных женщин к группе повышенного риска по развитию аномалий кариотипа плода и невынашиванию.