Шеечный фактор бесплодия. Посткоитальный тест.

 

Посткоитальный тест

по материалам ВОЗ (2000г.)

Для встречи с яйцеклеткой сперматозоиды должны пройти по репродуктивному тракту женщины, включающему канал шейки матки, полость матки и маточных труб. И на каждом этапе происходит взаимодействие сперматозоидов с секретами женского репродуктивного тракта, и это взаимодействие является важным этапом естественного отбора и запуска реакций, необходимых для оплодотворения яйцеклетки. К сожалению, практических методов, позволяющих оценить влияние секрета слизистой матки, трубной жидкости на сперматозоиды, не существует. Но достаточно легки и доступны методы оценки взаимодействия сперматозоидов со слизью цервикального канала.

Изучение взаимодействия спермы и цервикальной слизи - важный этап при обследовании супружеской пары по поводу бесплодия.

Впервые подвижность сперматозоидов в цервикальной слизи была обнаружена в 1866 году ученым М. Симсом. Однако длительное время это открытие оставалось без внимания, и только в 1913 году Хунер повторил исследование, и с тех пор посткоитальный тест (тест Симса-Хунера) вошел в практику обследования супружеских пар с бесплодием. За это время были предложены разные модификации метода, но суть - определение количества и подвижности сперматозоидов в цервикальной слизи через некоторое время после полового акта - осталась прежней.

Способность сперматозоидов проникать через цервикальную слизь зависит, как от подвижности и морфологии сперматозоидов, так и от характеристик цервикальной слизи.

Канал шейки матки (цервикальный канал) является первым этапом, который должны преодолеть сперматозоиды. Канал шейки матки выстлан различными типами эпителиальных клеток. Характер и содержание секреторных гранул в эпителиальных клетках разных отделов цервикального канала отличается, а их секрет является одним из компонентов цервикальной слизи. Образование цервикальной слизи в эпителии канала шейки матки находится под контролем гормонов яичников, и ее качественные и количественные характеристики подвергаются циклическим изменениям соответственно фазам менструального цикла. Эстрогены (17B-эстрадиол) - гормоны первой фазы цикла - стимулируют образование обильной цервикальной слизи, в то время как прогестерон секреторную активность желез шейки матки подавляет. У здоровых женщин репродуктивного возраста ежедневное образование цервикальной слизи варьирует от 500 мкл в середине цикла до менее, чем 100 мкл в другие периоды цикла. Помимо секрета желез шейки матки в состав цервикальной слизи может входить незначительное количество эндометриальной, трубной и, возможно, фолликулярной жидкости. Кроме этого, цервикальная слизь включает в себя лейкоциты, погибшие клетки эндометрия и эпителия канала шейки матки. И, таким образом, представляет собой гетерогенную субстанцию. Около 50% цервикальной слизи представлено водой.

Для цервикальной слизи характерны определенные реологические характеристики:

Консистенция, вязкость - определяется молекулярным составом цервикальной слизи и зависит от концентрации белков и ионов. В различные периоды менструального цикла консистенция цервикальной слизи различна, достигая наибольшей плотности перед менструацией (за счет увеличения количества клеточных элементов) и наименьшей (водянистой) в середине цикла перед овуляцией. После овуляции вязкость цервикальной слизи вновь начинает возрастать. Растяжимость - характеризует эластические качества цервикальной слизи. В периовуляторный период растяжимость достигает 12-14 см, в то время как в другие периоды цикла составляет всего лишь 3-4 см. Кристаллизация - свойство цервикальной слизи, наблюдаемое в период высыхания на стекле. В периовуляторный период цервикальная слизь образует на стекле узоры, напоминающие листья папоротника.

 

По своему составу цервикальная слизь представляет собой гидрогель, включающий компоненты высокой и низкой плотности: электролиты, органические составляющие и растворимые белки. Компоненты высокой плотности - макромолекулы муцина, во многом определяющие реологические характеристики слизи. Цервикальная слизь это фибриллярная система, включающая подгруппы пептидов в центре и цепи олигосахаридов по краям. Циклические изменения в структуре цервикальной слизи оказывают влияние на жизнеспособность и подвижность сперматозоидов в канале шейки матки. Благоприятные для сперматозоидов изменения в цервикальной слизи наступают приблизительно с 9-го дня нормального 28-дневного менструального цикла и постепенно возрастают, достигая пика в период овуляции, а увеличение вязкости в лютеиновой фазе цикла создает для сперматозоидов труднопреодолимый барьер. Помимо изменения вязкости цервикальной слизи миграции сперматозоидов препятствуют лейкоциты и погибшие клетки эпителия (что особенно выражено при воспалительном процессе в цервикальном канале). Индивидуальные особенности цервикальной слизи и сперматозоидов приводят к различиям во времени и способности сперматозоидов проходить через цервикальный канал в полость матки. Подвижные сперматозоиды могут задерживаться в цервикальной слизи крипт шейки матки, где они длительно сохраняют жизнеспособность и постепенно медленно проникают в полость матки.

Для осуществления репродуктивной функции наиболее важны некоторые свойства шейки матки и цервикальной слизи:

• Создание благоприятных условий для проникновения сперматозоидов в период овуляции и наоборот препятствия в другие периоды менструального цикла.
• Защита сперматозоидов от "враждебной" среды во в?@#$%&.
• Создание необходимых условий для энергии сперматозоидов
• Осуществление естественного отбора сперматозоидов на основании их подвижности и морфологии
• Создание на короткий промежуток времени резервуара сперматозоидов
• Запуск реакции капацитации

Важный момент, необходимый для правильной оценки взаимодействия сперматозоидов и цервикальной слизи, - выбор дня цикла для проведения теста. Это связано с изменениями цервикальной слизи и необходимостью проведения теста именно в периовуляторный период, когда наблюдаются наиболее благоприятные условия для сперматозоидов. У некоторых женщин тест становится положительным только в течение 1-2 дней периовуляторного периода.

Перед проведением теста обязательно оценивают состояние цервикальной слизи, что подразумевает оценку вязкости, растяжимости, кристаллизации и pH. По рекомендациям ВОЗ (2000г) для оценки свойств цервикальной слизи используют бальную систему, разработанную Moghissi в 1976 году. Максимальное число баллов равно 15. 10 баллов и более обычно характеризует хорошее состояние цервикальной слизи и благоприятные условия для пенетрации сперматозоидов, сумма баллов менее 10 соответствует неудовлетворительным изменениям цервикальной слизи. Количество баллов зависит от объема собранной цервикальной слизи, консистенции, кристаллизации и растяжимости.

При проведении теста цервикальная слизь собирается специальной пипеткой. Объем цервикальной слизи оценивается, как 0баллов - 0 мл; 1балл - 0.1 мл; 2 балла - 0.2 мл; 3 - 0.3 мл и более.

Один из наиболее важных показателей, влияющих на способность сперматозоидов к пенетрации, - консистенция цервикальной слизи. Наименьшая резистентность к проникновению сперматозоидов наблюдается в середине цикла, когда вязкость слизи минимальна, а повышенная вязкость в лютеиновую фазу создает труднопреодолимый барьер для сперматозоидов.Отмершие клетки и лейкоциты создают дополнительное препятствие для миграции сперматозоидов. Так, выраженный эндоцервицит часто сопровождается снижением фертильности. Консистенция оценивается, как: 0баллов при наличии плотной, высокой вязкости предменструальной слизи; 1 балл - слизь средней вязкости; 2 балла - незначительной вязкости; 3 балла - водянистая, минимальной вязкости преовуляторная слизь.

Кристаллизация это свойство цервикальной слизи, обнаруживаемое при исследовании под микроскопом. При нанесении на предметное стекло в периовуляторный период цервикальная слизь высыхает в виде структуры, подобной листу папоротника. В зависимости от состава слизи фигуры на стекле могут представлены только в виде стебля папоротника, либо иметь вторичные, третичные и четвертичные ответвления. Кристаллизация оценивается, как: 0баллов - нет кристаллизации; 1 балл - атипичная кристаллизация; 2 балла - первичная или вторичная структура папоротника; 3 балла - четвертичная и более структура.

Растяжимость цервикальной слизи оценивается в см при помощи специальных инструментов: 0 баллов - растяжимость менее 1 см; 1 балл - 1-4 см; 2 балла - 5-8 см; 3 балла - 9 и более см.

Дополнительно при микроскопии цервикальной слизи оценивается количество клеток ( лейкоцитов, погибших клеток эпителия) в 1 мл цервикальной слизи.

pH цервикальной слизи оценивается с помощью специальной тест-полоски сразу после сбора или непосредственно в цервикальном канале. В норме pH составляет 6.4-8.0. При проведении исследования важно исключить попадание слизи, содержащейся во в?@#$%&, т.к. pH содержимого влагалища ниже, чем эндоцервикальной слизи. На подвижность сперматозоидов изменения pH цервикальной слизи оказывают большое влияние. Кислая среда делает сперматозоиды неподвижными, в то время как щелочная увеличивает их подвижность. Тем не менее, чрезмерное защелачивание цервикальной слизи (pH более 8.5) может также оказывать неблагоприятное влияние на подвижность сперматозоидов. Оптимальное pH 7.0-8.0 наблюдается в периовуляторный период менструального цикла. Хотя, и pH 6.0-7.0 может быть совместимо с пенетрацией сперматозоидами. Значительное снижение pH цервикальной слизи зачастую связано с бактериальными инфекциями.

Дополнительно для определения качества цервикальной слизи и периода менструального цикла оценивается симптом "зрачка". Под термином симптом "зрачка" понимают вид цервикальной слизи в наружном зеве канала шейки матки. Симптом оценивается при осмотре врача. В периовуляторный период, когда цервикальной слизи много, и она имеет прозрачный и водянистый характер, симптом "зрачка" оценивается, как положительный.

Таким образом, цервикальная слизь доступна для пенетрации сперматозоидов в течение ограниченного периода времени. Длительность этого промежутка времени у каждой женщины индивидуальна, и может отличаться в разных циклах. Поэтому важный момент - правильный выбор времени проведения теста.

Оценка взаимодействия сперматозоидов и цервикальной слизи может проводиться как in vivo, так и in vitro. Посткоитальный тест - это исследование взаимодействия сперматозоидов и цервикальной слизи in vivo, т.е. оценка количества и подвижности сперматозоидов в цервикальной слизи через некоторое время после полового акта. Методы in vitro подразумевают оценку проникновения и подвижности сперматозоидов в цервикальную слизь на стекле.

В настоящее время предложены различные модификации посткоитального теста. Основное различие - длительность промежутка времени между проведением исследования и коитусом. Классический посткоитальный тест (проба Шуварского) рекомендуется проводить через 4-6 часов после полового акта. По рекомендациям ВОЗ от 2000г для проведения теста рекомендуется промежуток времени от 9 до 24 часов.

Памятка для пациентов: Время (день цикла) проведения посткоитального теста определяется индивидуально в зависимости от продолжительности цикла, результатов измерения БТ (базальная температура), тестов на овуляцию, изменений цервикальной слизи по данным осмотра. Перед проведением теста в большинстве случаев рекомендуется воздержание от половой жизни в течение 2-3 дней. Хотя, твердого мнения на этот счет не существует. За 2-3 дня до и в день проведения исследования нежелательно использование любрикантов и влагалищных форм лекарств. В день проведения теста после коитуса не рекомендуется принимать ванну, но можно принять душ.

Техника проведения ПКТ: специальной пипеткой проводят забор слизи из цервикального канала и заднего свода влагалища. Образцы слизи наносят на предметное стекло и изучают под микроскопом. Во в?@#$%& сперматозоиды обычно погибают в течение 2 часов после коитуса. Обнаружение погибших или подвижных сперматозоидов в пробе из влагалища гарантирует то, что сперма попала во в?@#$%&. При исследовании цервикальной слизи оценивают число и подвижность сперматозоидов в поле зрения.

Количество сперматозоидов в нижней части цервикального канала изменяется в зависимости от времени, прошедшего после полового акта. Наибольшее количество сперматозоидов в нижней части цервикального канала наблюдается через 2-3 часа после коитуса. В зависимости от подвижности выделяют быстрые прогрессивно подвижные сперматозоиды (класс А), медленные прогрессивно подвижные сперматозоиды (класс В), сперматозоиды с неправильным движением (класс С), неподвижные сперматозоиды (класс D). Наиболее важный критерий нормального проникновения сперматозоидов в цервикальную слизь - обнаружение сперматозоидов класса А.

Результаты посткоитального теста могут быть отражены, как отрицательный или положительный. Цель посткоитального теста - не только определить число активно-подвижных сперматозоидов, но и оценить выживание сперматозоидов через длительное время после коитуса (роль резервуара). Таким образом, тест проведенный через 9-24 часа после коитуса характеризует именно выживаемость сперматозоидов. При этом обнаружение единичных подвижных сперматозоидов в эндоцервиксе свидетельствует против возможного шеечного фактора, как причины бесплодия.

Отсутствие сперматозоидов во в?@#$%& и цервикальной слизи могут быть связаны с нарушением эякуляции и непопаданием сперматозоидов в половые пути женщины.

Посткоитальный тест является одним из самых "капризных" методов обследования при бесплодии. Очень часто причиной отрицательного ПКТ становится слишком раннее или слишком позднее проведение исследования, местные воспалительные процессы, повышение вязкости цервикальной слизи, связанное с низким уровнем эстрогенов перед овуляцией в цикле исследования. Однократный отрицательный ПКТ не указывает достоверно на наличие шеечного фактора бесплодия, т.к. может быть связан с неправильным проведением. В случае отрицательного результата рекомендуется повторное проведение теста в следующем цикле, а в ряде случаев проведение теста in vitro.

Также как и ПКТ, тест in vitro (проба Курцрока-Миллера) проводится в периовуляторный период. На предметное стекло помещают каплю спермы и каплю цервикальной слизи. Капли покрывают покровным стеклом. Под микроскопом оценивают проникновение сперматозоидов на границе спермы и цервикальной слизи. При положительной пробе спермии проникают через границу слизи, при отрицательной - этого явления не наблюдается. При отрицательном результате пробы дополнительно могут быть проведены перекрестные пробы с донорской спермой и донорской цервикальной слизью.

Отрицательные тесты взаимодействия сперматозоидов и цервикальной слизи могут указывать на участие шеечного фактора в проблеме бесплодия. Для исключения иммунных нарушений (наличие антиспермальных антител в сперме или цервикальной слизи), как причины отрицательного ПКТ, проводится дополнительное обследование, включающее MAR-тест, определение уровня АСАТ (антиспермальные антитела) в крови и цервикальной слизи. При подтверждении роли антиспермального иммунитета в генезе бесплодия проводится десенсибилизирующая терапия (прекращение контакта женского организма со спермой на несколько месяцев), что приводит к снижению уровня АСАТ, иммуносупрессивная терапия (глюкокортикоиды). При неэффективности консервативной терапии к методам выбора относится внутриматочная инсеминация (механическое преодоление шеечного фактора) и методы вспомогательных репродуктивных технологий (ЭКО, ИКСИ).